Beta glukan

Uporaba in načelo

Uporaba in načelo This procedure is used to determine Beta glucan activity of enzyme preparations derived from Aspergillus niger var. and Bacillus subtilis var. The assay is based on a 15-min hydrolysis of lichenin substrate at 40°and at pH 6.5. The increase in reducing power due to liberated reducing groups is measured by the neocuproine method.

Reagenti in rešitve
Fosfatni pufer Raztopite 13,6 g monobaznega kalijevega fosfata v približno 1900 ml vode, dodajte 70% raztopino natrijevega hidroksida, dokler pH ne postane 6,5 ± 0,05, nato raztopino prenesite v 2000-mililitrsko merilno bučko, razredčite z vodo do oznake in premešajte.
Raztopina neokuproina A 40,0 g brezvodnega natrijevega karbonata, 16,0 g glicina in 450 mg bakrovega sulfat pentahidrata raztopite v približno 600 ml vode. Raztopino prenesemo v 1000-mililitrsko merilno bučko, do prostornine razredčimo z vodo in premešamo.
Raztopina neokuproina B Raztopite 600 mg neokuproinijevega klorida v približno 400 ml vode, raztopino prenesite v 500-mililitrsko merilno bučko, razredčite z vodo in premešajte. Zavrzite, ko se razvije rumena barva.
Podloga za lihenin Zmeljemo 150 mg lihenina (Sigma Chemical Co., kataloška št. L-6133 ali enakovredno) v droben prah v možnarju in ga raztopimo v približno 50 ml vode pri približno 85 °. Po končani raztopini (20 do 30 minut) dodajte 90 mg natrijevega borohidrida in nadaljujte s segrevanjem pod vreliščem 1 uro. Dodajte 15 g Amberlite MB-3 ali enakovredno ionsko izmenjevalno smolo in neprekinjeno mešajte 30 minut. Filtrirajte s pomočjo vakuuma skozi filtrirni papir Whatman No. 1 ali enakovreden izdelek v liju Büchner in papir sperite z približno 20 ml vode. Filtratu dodajte 680 mg monobaznega kalijevega fosfata in ponovno filtrirajte skozi 0,22 µm filtrirno blazinico Millipore ali enakovredno. Blazinico sperite z 10 ml vode in z 1 N natrijevega hidroksida ali 1 N klorovodikove kisline pH filtrata nastavite na 6,5 ​​± 0,05. Filtrat prenesite v 100-mililitrsko merilno bučko, do prostornine razredčite z vodo in premešajte. Shranjujte pri temperaturi od 2 ° do 4 ° največ 3 dni.
Standardna raztopina glukoze V 1000-mililitrski merilni bučki raztopite 36,0 mg brezvodne dekstroze v fosfatnem pufru, razredčite z vodo in premešajte.
Priprava testa Pripravite raztopino iz vzorca encimskega pripravka, tako da bo 1 ml končne razredčitve vsebovalo med 0,01 in 0,02 enotami beta glukana. Vzorec stehtamo, prestavimo v merilno bučko ustrezne velikosti, razredčimo do oznake s fosfatnim pufrom in premešamo.

Postopek
V vsako od štirih ločenih epruvet, graduiranih na 25 ml, odpipetirajte 2 ml substrata lihenina in epruvete segrevajte v vodni kopeli pri 40 ° 10 do 15 minut, da se uravnoteži.
Po uravnoteženju dodajte 1 ml fosfatnega pufra v epruveto 1 (slepi substrat), 1 ml standardne raztopine glukoze v epruveto 2 (glukozni standard), 4 ml raztopine neokuproina A in 1 ml pripravka za preskus v epruveto 3 (encimski slepi prostor) ) in 1 ml pripravka za preskus v epruveto 4 (vzorec). Pripravite peto epruveto za blazinico in dodajte 3 ml fosfatnega pufra.
Pet epruvet inkubirajte natančno 15 minut pri 40 °, nato pa v epruvete 1, 2, 4 in 5 dodajte 4 ml raztopine neokuproina A v vseh pet epruvet in v vsako zaprite ustrezen pokrov. velik stekleni marmor.
[POZOR: Ne uporabljajte gumijastih zamaškov. ]
Epruvete segrevajte v močno vreli vodni kopeli natanko 12 minut, da se razvije barva, nato v hladni vodi ohladite na sobno temperaturo in z vodo prilagodite količino vsake na 25 ml. Zaprite epruvete s Parafilmom ali drugim ustreznim zapiralcem in premešajte tako, da večkrat obrnete.
Z ustreznim spektrofotometrom določimo absorbanco vsake raztopine pri 450 nm v 1-cm celicah z ustreznim spektrofotometrom proti puferskemu slepemu v epruveti 5.

Izračun
Ena enota beta glukana (BGU) je opredeljena kot tista količina encima, ki bo sprostila reducirajoči sladkor (kot enakovrednost glukoze) s hitrostjo 1 µmol / min pod pogoji preskusa.
Izračunajte aktivnost encimskega pripravka, odvzetega za analizo, na naslednji način:
BGU = [(A4 A3) à - 36 à - 106] / [(A2 A1) à - 180 à - 15 à - µg vzorca]

pri kateri je A4 absorbcija vzorca (epruveta 4), A3 absorbcija slepega encima (epruveta 3), A2 absorbance glukoznega standarda (epruveta 2), A1 je absorpcija slepe podlage (tuba 1), 36 mikrogramov glukoze v standardni raztopini glukoze, 106 faktor, ki mikrograme pretvori v grame, 180 je teža 1 µmol glukoze in 15 reakcijski čas v minutah.

POTRDILO O ANALIZI

* Zgornje informacije so neposreden prevod informacij, ki jih je proizvajalcu tega izdelka posredoval Newgen Biotech. To potrdilo o analizi je treba uporabljati v informativne namene in ni namenjeno nadomestitvi stroge analize kakovosti s strani kupca tega izdelka.

Pakiranje in skladiščenje

Trdna vrečka za pakiranje hrane, 25 kg / sod.

Shranjujte v suhih, hladnih in dobro prezračevanih prostorih stran od sonca in toplote.

Plačilo:T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-preverjanje, plačilo pozneje, LC itd.